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6-磷酸葡萄糖脫氫酶試劑盒太棒了!

更新時(shí)間:2017-11-20      瀏覽次數(shù):1339

6-磷酸葡萄糖脫氫酶試劑盒太棒了!

測(cè)定意義:
G6PDH(EC 1.1.1.49)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是磷酸戊糖途徑的關(guān)
鍵酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯,同時(shí)將NADP+還原為NADPH,供
生物合成及維持細(xì)胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程
度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。
 

測(cè)定原理:
G6PDH 催化NADP+還原生成NADPH,在340 nm 下測(cè)定NADPH 增加速率。
 

需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸
餾水。
 

試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體47.5 mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存;
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存;

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測(cè)定步驟:
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解;在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)
水浴10min 以上;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 樣本和950μL 試劑一,混勻后立即記錄340nm 處1min
后吸光值A(chǔ)1 和 6min 后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A2-A1。
 

注意:若ΔA 大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)?;?qū)⒎磻?yīng)
時(shí)間縮短至2min,使A2-A1 小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。

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