91大神精品在线视频在线-亚洲国产综合在线观看不卡-久久夜色精品亚洲天堂-日本一道综合久久aⅴ免费

熱門搜索: 肌酸激酶MB型同工酶(CK-MM)質(zhì)控樣品 抗血漿鑒別試劑盒 甲種胎兒球蛋白抗原 重組核心鏈霉親和素 2(不帶標(biāo)簽) 重組鏈霉親和素(r-ScSA)(NC膜專用) 重組鏈霉親和素(帶His標(biāo)簽) 羊抗人視-黃醇結(jié)合蛋白多克隆抗體 大鼠白細胞介素1β(IL-1β)試劑盒(ELISA) 人堿性成纖維細胞生長因子ELISA試劑盒 1%豚鼠紅細胞 2%雞紅細胞 1%雞紅細胞 重組人線粒體核糖體蛋白S2(MRPS2) 重組人蛋白酶體激活物亞基1(PSME1)蛋白 重組人肝癌衍生生長因子相關(guān)蛋白3 重組人FAM83A蛋白

PRODUCT CLASSIFICATION

產(chǎn)品分類

技術(shù)文章/ Technical Articles

您的位置:首頁  /  技術(shù)文章  /  WB實驗代測的優(yōu)勢及操作步驟

WB實驗代測的優(yōu)勢及操作步驟

更新時間:2020-08-19      瀏覽次數(shù):1654
   一:WB實驗代測的優(yōu)勢:
  下面我們就做WB實驗代測的原理以及大致需要的操作做了一個匯總。
  1、western免疫印跡是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。
  2、與southern或northern雜交方法類似,但western免疫印跡采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。
  3、經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。
  4、以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。
  二:WB實驗代測的操作步驟:
  1、蛋白質(zhì)樣品獲得:細菌誘導(dǎo)表達后,可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞,真核細胞加勻漿緩沖液,機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃,13,000g離心15min。取上清液作為樣品。
  2、WesternBlot實驗電泳:制備電泳凝膠,進行SDS-PAGE。
  3、WesternBlot實驗轉(zhuǎn)移:(半干式轉(zhuǎn)移)
  4、電泳結(jié)束后將膠條割至合適大小,用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡。
  5、膜處理:預(yù)先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜,浸入轉(zhuǎn)膜緩沖液中10min。
  6、轉(zhuǎn)膜:轉(zhuǎn)膜裝置從下至上依次按陽極碳板、標(biāo)準(zhǔn)層濾紙、NC膜、凝膠、標(biāo)準(zhǔn)層濾紙、陰極碳板的順序放好,濾紙、凝膠、NC膜準(zhǔn)確對齊,每一步去除氣泡,上壓500g重物,將碳板上多余的液體吸干。
  7、接通電源,恒流1mA/cm2,轉(zhuǎn)移1.5hr。轉(zhuǎn)移結(jié)束后,斷開電源將膜取出,割取待測膜條做免疫印跡實驗。將有蛋白標(biāo)準(zhǔn)的條帶染色,放入膜染色液中50s后。
  8、在50%甲醇中多次脫色,至背景清晰,然后用雙蒸水洗,風(fēng)干夾于兩層濾紙中保存,留與顯色結(jié)果作對比。
  總結(jié):實驗代測中的優(yōu)勢及操作步驟,看完本文您就應(yīng)該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧!總的來說,希望對大家有所幫助。
微信掃一掃

郵箱:1170233632@qq.com

傳真:021-51870610

地址:上海市顧戴路2988號B幢7樓

Copyright © 2025 上海信帆生物科技有限公司版權(quán)所有   備案號:滬ICP備13019554號-1    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)

TEL:13764793648

掃碼加微信
舟曲县| 柳州市| 澜沧| 通河县| 舞阳县| 新建县| 朝阳县| 定安县| 泽州县| 拜泉县| 马龙县| 兴安盟| 望奎县| 丰城市| 微山县| 肃南| 保定市| 永新县| 玉林市| 万盛区| 临城县| 青海省| 旅游| 华蓥市| 黄石市| 万年县| 台州市| 江永县| 诏安县| 和林格尔县| 万盛区| 东光县| 册亨县| 平顺县| 留坝县| 苏州市| 岑巩县| 藁城市| 鞍山市| 湘潭市| 治县。|