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抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色實驗代測

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色實驗服務
服務介紹:TRAP染色,即抗酒石酸酸性磷酸酶染色, 是一種羰基化的含金屬蛋白酶,在破骨細胞和破軟骨細胞中高表達,為破骨細胞的標志酶,在活化的巨噬細胞和神經(jīng)元中也有一定的表達。TRAP在細胞信號轉(zhuǎn)導、細胞增殖和分化等方面均具有重要作用,也與活性氧的產(chǎn)生以及鐵離子轉(zhuǎn)運有關。破骨細胞中TRAP主要分布于胞漿,目前,TRAP染色主要用于鑒定破骨細胞的存在狀

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  • 更新時間:2025-02-18
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抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色實驗服務


服務介紹:TRAP染色,即抗酒石酸酸性磷酸酶染色, 是一種羰基化的含金屬蛋白酶,在破骨細胞和破軟骨細胞中高表達,為破骨細胞的標志酶,在活化的巨噬細胞和神經(jīng)元中也有一定的表達。TRAP在細胞信號轉(zhuǎn)導、細胞增殖和分化等方面均具有重要作用,也與活性氧的產(chǎn)生以及鐵離子轉(zhuǎn)運有關。破骨細胞中TRAP主要分布于胞漿,目前,TRAP染色主要用于鑒定破骨細胞的存在狀態(tài)。
檢測原理:
TRAP
是破骨細胞的特異性標志酶,能夠在酸性環(huán)境中水解磷酸酯。在含有酒石酸的酸性條件下,TRAP能夠水解萘酚AS-BI磷酸酯,生成的萘酚AS-BI與顯色劑(如偶氮副品紅、fast red或六唑-副玫瑰苯胺等)結(jié)合,形成不溶于水的紅色沉淀。這一反應僅在破骨細胞中發(fā)生,因此可以通過顯微鏡觀察到特定細胞的紅色顆粒,從而實現(xiàn)定位。
實驗步驟:
1
、樣本準備:準備骨組織的石蠟切片、冰凍切片或培養(yǎng)的破骨細胞。樣本的制備質(zhì)量直接影響染色效果,因此應嚴格按照標準操作程序進行。
2
、固定與清洗:使用適當?shù)墓潭ㄒ海ㄈ?/span>4%的多聚甲醛)固定樣本,然后用PBS緩沖液清洗,以去除殘留的固定液和雜質(zhì)。
3
、染色液配制:按照一定比例和順序配制TRAP染色工作液。注意,染色液應現(xiàn)配現(xiàn)用,避免長時間儲存導致成分分解影響染色效果。
4
、染色:將配制好的染色液倒入染色缸中,水浴加熱至適當溫度(通常為37℃)。將樣本放入染色缸中,避光孵育一定時間(如45-60分鐘)。孵育時間應根據(jù)實驗目的和樣本類型進行調(diào)整。
5
、復染:使用蘇木染色液或甲基綠染色液對樣本進行復染,以增強細胞核的對比度。復染時間也應根據(jù)實驗需求進行調(diào)整。
6
、后處理:染色后的樣本需要用去離子水清洗,以去除未反應的染色液。然后依次經(jīng)過脫水、透明和封片等步驟處理。
注意事項:
1
、實驗條件控制:TRAP染色通常在37℃下進行,以保證酶活性的最佳狀態(tài)。過高或過低的溫度都可能導致酶活性下降,影響染色效果。
2
、染色時間把握:染色時間是影響TRAP染色結(jié)果準確性的重要因素。過短的染色時間可能導致染色不充分,而過長的染色時間則可能導致背景染色增加,影響結(jié)果的判讀。
3
、染色液避光保存:TRAP染色液中的某些成分對光敏感,容易在光照下分解。


抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色實驗服務



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